Блог

Oct 24, 2023

Иммуногенность секретируемого, C

Научные отчеты, том 13,

Научные отчеты, том 13, Номер статьи: 296 (2023) Цитировать эту статью

729 Доступов

1 Альтметрика

Подробности о метриках

Как существующие в настоящее время живые, аттенуированные и убитые вирусные вакцины против вируса вирусной диареи крупного рогатого скота (BVDV) имеют свои ограничения. Здесь мы сообщаем о разработке субъединичной вакцины BVDV путем (i) экспрессии секретируемой формы рекомбинантного гликопротеина E2 с использованием клеток BHK21 и (ii) определения иммунных ответов у мышей. Гликопротеин Е2 был модифицирован путем удаления С-концевого трансмембранного якорного домена и слияния с меткой эпитопа V5. Это позволило обнаружить с помощью моноклональных антител против V5 вместе с простой очисткой экспрессированной, секретируемой формы E2 из клеточной среды. Кроме того, мы генетически слили зеленый флуоресцентный белок (GFP), связанный с E2 через последовательность пропуска рибосомы вируса Thea asigna 2A (T2A), тем самым создав самопроцессирующийся полипротеин [GFP-T2A-BVDV-E2trunk-V5], производящий дискретный [GFP- Продукты трансляции T2A] и [E2trunk-V5]: флуоресценция GFP действует, поэтому в качестве суррогатного маркера экспрессии E2 мышам BALB/c инокулировали [E2trunk-V5], очищенный из клеточной среды, и наблюдали как гуморальный, так и клеточный иммунный ответ. . Таким образом, наша система экспрессии антигенов обеспечивает как (i) простой протокол очистки антигена, так и (ii) осуществимую стратегию дальнейшего крупномасштабного производства вакцин.

Вирус вирусной диареи крупного рогатого скота (BVDV) является основным инфекционным агентом крупного рогатого скота, свиней и других жвачных животных; он вызывает вирусную диарею крупного рогатого скота и заболевания слизистых оболочек, что приводит к различным клиническим исходам: от легкого заболевания до острого и тяжелого заболевания, опасного для жизни1. Клинические признаки инфекции BVDV включают лихорадку, депрессию, анорексию, эрозии слизистых оболочек, гнойные выделения из глаз и носа, кашель, атонию рубца, диарею, аборты и снижение надоев2. Инфекция BVDV также вызывает иммуносупрессию, тем самым повышая восприимчивость к бактериальной или вирусной пневмонии3. У животных с иммуносупрессией, вызванной BVDV, воздействие других патогенов может значительно увеличить заболеваемость и смертность, что оказывает соответствующее пагубное экономическое воздействие на мясную и молочную промышленность4,5.

Геном BVDV представляет собой одноцепочечную позитивно-сенсорную РНК размером примерно 12,3 т.п.н. BVDV принадлежит к роду Pestivirus семейства Flaviviridae, наряду с вирусом пограничной болезни (поражающим овец) и вирусом классической чумы свиней6. BVDV включает два основных генотипа: BVDV-1 (пестивирус A, разделенный на 22 подтипа от BVDV-1a до BVDV-1v) и BVDV-2 (пестивирус B, разделенный на четыре подтипа от BVDV-2a до BVDV-2d). Другой атипичный пестивирус, известный как HoBi-подобный вирус, был предварительно идентифицирован как BVDV-3, имеющий четыре подтипа7. Каждый BVDV имеет два биотипа: цитопатический и нецитопатический, в зависимости от воздействия вируса, выращенного на культивируемых клетках. Нецитопатический штамм не повреждает инфицированные клетки8. Он может заразить развивающийся плод, если коровы подверглись воздействию вируса на ранних сроках беременности. Более того, BVDV сохраняется в стаде за счет производства постоянно инфицированных (PI) телят9, поскольку они становятся иммунотолерантными к вирусу и выделяют большое количество вируса на протяжении всей своей жизни. Таким образом, животные с ПИ считаются основным источником распространения BVDV10. Наиболее эффективные меры в программах профилактики BVDV включают меры биобезопасности, искоренение ПИ крупного рогатого скота и вакцинацию5,11.

Современные вакцины против BVDV представляют собой поливалентные вакцины с модифицированным живым вирусом и вакцины с инактивированным вирусом11,12,13,14. Коммерчески доступные живые, аттенуированные и инактивированные вакцины имеют ограниченную безопасность и эффективность: модифицированная живая вирусная вакцина может вернуть вирулентность и привести к ИП телят, тогда как инактивированная вирусная вакцина имеет кратковременную защиту и не может стимулировать клеточный иммунный ответ15. Таким образом, для долгосрочной защиты крупного рогатого скота от BVDV необходима безопасная и эффективная субъединичная вакцина против BVDV.